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琼脂糖凝胶电泳原理
时间:2024-12-23 20:59:31
答案

琼脂糖凝胶电泳是一种特别的电泳技术,其核心在于使用琼脂糖作为支持介质。这个方法的独特之处在于它融合了"分子筛"和"电泳"两种效应。琼脂糖凝胶的网络结构使得分子在通过时会遇到阻力,阻力的大小与分子大小相关,大分子物质移动时阻力更大。因此,带电颗粒在凝胶中的分离不仅依赖于电荷性质和数量,还取决于分子的实际尺寸,这种特性显著提高了其分辨能力。

尽管琼脂糖的孔径相对较大,对大多数蛋白质的分子筛作用较弱,但它在核酸研究中的应用却非常广泛。蛋白质和核酸的电泳分离基于它们的电荷差异,pH在6到9的电泳缓冲液中,离子强度在0.02到0.05范围内最理想。通常,1%的琼脂糖被用作电泳支持物。它能够区分大约相差100bp的DNA片段,尽管分辨率略低于聚丙烯酰胺凝胶,但其优点在于制备简便,分离范围广泛,可以达到0.2-20kb的DNA片段。

在琼脂糖凝胶电泳中,DNA分子的泳动受电荷效应和分子筛效应影响。当DNA处于高于等电点的pH溶液中时,它会带负电,从而在电场中向正极移动。由于DNA的糖-磷酸骨架结构重复,双链DNA的净电荷量相近,所以它们在电泳中的移动速度基本一致。

扩展资料

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

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