缺斤少两打一最佳生肖是“鼠”。

在中国传统文化中，十二生肖各自代表着不同的特质和象征意义。当我们提到“缺斤少两”这个成语时，它通常用来形容东西不够分量，或者说是不完整、有所缺失的。在这个语境下，我们需要找到一个与“缺失、减少”概念相符合的生肖。

在十二生肖中，“鼠”因其小巧、敏捷的特性，以及在某些文化中与“偷窃、小聪明”相关联的形象，可以被理解为在数量或分量上有所“缺失”的象征。虽然这种联系并不是直接的，但通过象征性的解读，“鼠”这一生肖与“缺斤少两”之间建立了一种隐喻性的关联。

此外，“鼠”在十二生肖中排名第一，有着特殊的地位。但在一些民间故事中，鼠之所以能排在首位，是因为它利用了其他动物的善良或疏忽，这也间接反映了“鼠”在某些情境下可能与“不足、缺失”的概念有关。因此，从文化象征和民间传说的角度来看，“鼠”可以被视为与“缺斤少两”最为契合的生肖。

综上所述，通过对十二生肖文化象征意义的理解和对“缺斤少两”成语内涵的把握，我们可以推断出“鼠”是这一谜题的最佳答案。这种解读既体现了语言的趣味性，也展现了传统文化的深厚底蕴。