根据流动相和固定相相对极性不同，液相色谱分为正相色谱和反相色谱。流动相极性大于固定相极性的，称为反相色谱。固定相极性大于流动相极性的，称之为正相色谱。

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

原理：分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中，K有不同的概念：吸附色谱法为吸附系数，离子交换色谱法为选择性系数　（或称交换系数），凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。

在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定，样品浓度很低时（Cs、Cm很小）时，K只取决于组分的性质，而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰；在许多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。因此，只有尽可能减少进样量，使组分在柱内浓度降低，K恒定时，才能获得正常峰。

色谱：（high performance liquid chromatography,HPLC）也叫高压液相色谱（high pressure liquid chromatography）、高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分离度液相色谱（high resolution liquid chromatography）等或Efficient liquid chromatographyspectrometry。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。

高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。

使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

主要类型：

液固吸附色谱：

分离原理 液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的，其固定相是固体吸附剂。

固定相 ；吸附色谱固定相可以分为极性和非极性两大类。

流动相 ；流动相要求：选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性。选用的溶剂应有高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如果使用紫外吸收检测器，就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂；若使用示差折光检测器，就不能用梯度洗脱。选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。选用的溶剂应具有低的黏度和适当低的沸点。应尽量避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全

应用：液固色谱是以表面吸附性能力为依据的，所以它常用于分离极性不同低的化合物，也能分离那些具有相同极性基团，但数量不同的样品。

液液分配色谱：

分离原理 ；分配色谱法的原理与液液萃取相同，都是分配定律。

固定相 ；分配色谱固定相由两部分组成，一部分是惰性载体，另一部分是涂渍在惰性载体上的固定液。

流动相 ；分内色谱中，要求流动相尽可能不与固定液互溶。

应用 ；既能分离极性化合物，又能分离非极性化合物。由于不同极性键合固定相的出现，分离的选择性可得到很好的控制。

键合相色谱：

分离原理 ：正键合相色谱分离远离：使用的是极性键和固定性，溶质在此类固定相上的分离机理属于分配色谱。

反键合相色谱分离原理：使用的是极性较小的键合固定相，其分离机理可用疏溶剂作用理论来解释。

固定相 ；按极性大小可分为非极性、弱极性、极性化学键合固定相三种。

流动相：正键合相色谱中，采用和反相液液分配色谱相似的流动相，流动相的主体成分为己烷或庚烷。反相键合相色谱中，流动相采用和反相液液分配色谱相似的流动相，主题为水。

应用：正键合相色谱法的应用：多用于分离各类极性化合物如染料、炸药、多巴胺、氨基酸等；反键合相色谱法的应用：由于操作简单，稳定性和重复性好，该方法已成为一种通用型液相色谱分析方法。在生物化学、医药研究、食品分析和环境污染分析等多个领域有了很大的应用和发展。

凝胶色谱：凝胶色谱又称分子排阻色谱，它是按照分子尺寸大小顺序进行分离的一种色谱方法。凝胶色谱法的固定相凝胶是一种多孔性的聚合材料，有一定的形状和稳定性。根据所用流动相的不同，凝胶色谱法可以分为两类：即用水溶剂做流动相的凝胶过滤色谱法（GFC）与用有机溶剂如四氢呋喃做流动相的凝胶渗透色谱法（GPC）。